Hoefer SE250 - Manual (Page 25)

Apéndice
El siguiente sistema de Laemmli está ligeramente
modificado para uso con las unidades de
mini-verticales. El sistema de Laemmli es
el protocolo más común para electroforesis
SDS-desnaturalizadas proteínas. El ion principal
en este sistema de tampón discontinuo es
el cloruro y el ion final es la glicina. En
consecuencia, el gel de resolución y el gel de
apilamiento contener tampones Tris-Cl (de
diferente concentración y pH), y el tampón de
electroforesis contiene Tris-glicina. Todos los
tampones contienen 0,1% de SDS.
La composición en gel de poliacrilamida se
indica mediante dos diferentes porcentajes:
% T = total acrylamide = g (acryl + bis) × 100
100 mL
% C = crosslinker = g (bis) × 100
g (acryl + bis)
El porcentaje total de acrilamida (% T) en el gel
de separación, que puede variar desde 5 a 20%,
determina el tamaño del poro. Comúnmente,
la cantidad de reticulante utilizado (% de C)
es de 2,6%. En el sistema siguiente ejemplo,
la composición gel de resolución es de 10% T,
2,6% de C, que da como resultado un tamaño
de poro medio. La composición de gel de
apilamiento es 4% T, 2,6% C. La T% en el gel
de apilamiento es menor debido a un tamaño de
poro grande se requiere.
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SE250 resultados:
Carril 1: SDS-6H, alto MW
mezcla estándar, Sigma™
Carril 2: SDS-7 Dalton Mark
VII-L™, Sigma (10
µl por
carril)
Gel
12% de SDS PAGE manchado
con azul de Coomassie
Condiciones de funcionamiento
20 mA, a una hora