Hoefer SE400 - Manual (Page 23)

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2.3 Preparación de la muestra
La cantidad de muestra cargada depende del espe-
sor del gel, la sensibilidad del método de detec-
ción utilizado, y la cantidad de muestra se espera
en cada banda. En un sistema tampón continuo,
la muestra de proteína debe ser relativamente
concentrada porque ningún gel de apilamiento se
utiliza. En un sistema de tampón discontinuo, la
zona en la que cada especie molecular migra se
agudiza por el gel de apilamiento, de modo que la
muestra no necesita ser tan concentrada.
1
Preparar los pozos. Quite el peine suavemente movié-
ndola de lado a lado y luego levantándolo hacia arriba
para evitar daños en las paredes del pozo. Enjuagar
cuidadosamente cada pocillo con el tampón de elec-
troforesis de acrilamida no polimerizada para eliminar
y drenar invirtiendo el emparedado de gel (o ruedas).
Llene cada pocillo con el tampón de electroforesis.
2
Preparar la muestra. Aumentar la densidad de líquido
de muestra con 10% de glicerol o sacarosa. Añadir
un tinte de seguimiento como el rojo fenol, azul de
bromofenol, o Y. pironina
Para geles de proteínas SDS, utilice 2X tampón de
tratamiento para desnaturalizar muestras líquidas y en
seco en un tubo de ensayo:
Para muestras de proteínas líquidas, añadir un volu-
men igual de tampón de tratamiento 2X.
Para secar las muestras de proteínas, añadir
volúmenes iguales de tampón tratamiento 2X y agua
desionizada para alcanzar la concentración deseada.
Calentar el tubo en agua hirviendo durante 90 segun-
dos, luego se deja enfriar a temperatura ambiente.
Las muestras tratadas se pueden almacenar a -40 a
-80 °C durante carreras futuras.
Proteínas de membrana de calor a 60 °C durante
20 minutos. No conserve la muestra utilizada a 4 °C.
Tabla 2. El volumen de bodega
(µl) por la profundidad de 1 mm
para cada tamaño de peine
Espesor de peine
(mm)
Número
de pozos 0,75 1,0 1,5
10 6,2 8,3 12,4
12 5,8 7,7 11,5
15 4,3 5,7 8,6
20 3,1 4,1 6,2
28 2,1 2,7 4,1