Hoefer HE33 - Manual (Page 23)

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ADN detección
ADN puede ser detectada por la fluorescencia de
bromuro de etidio consolidado o por autorradiografía
de ADN marcado radiactivamente.
El bromuro de etidio (0,5 µg/ml) se puede añadir a la
ejecución de tampón para controlar el progreso de la
muestra debido a la fluorescencia del colorante en vir-
tud de una lámpara UV revela ubicación banda. (Para
comprobar el progreso, apague la fuente de alimen-
tación y retire la tapa de la unidad de agarosa. Man-
tenga un portátil lámpara UV cerca de la bandeja en
funcionamiento. Vuelva a colocar la tapa y encienda la
alimentación de nuevo para reanudar la electroforesis.)
Alternativamente, después de la electroforesis, el
gel mancha en una solución de bromuro de etidio
(0,5 µg/ml H
2
O) durante 15 a 60 minutos y luego ver
o fotografiar la muestra sobre un transiluminador UV.
Para fotografiar el gel, ya sea colocar la bandeja que
se ejecuta en la superficie transiluminador o desli-
ce el gel sobre la superficie de exposición máxima.
(La bandeja de ejecución es del 95% transparente
a 302 nm de luz y un 40% transparente a la luz
de 254 nm.) Ver la muestra a la luz ultravioleta de
366 nm o menor intensidad 302-nm de luz UV para
reducir photonicking.
Para reducir la fluorescencia de fondo de bromuro de
etidio no unido, el gel puede ser destained por remojo
durante 5 minutos en 0,01 m MgCl
2
, o durante 1
hora en 0,001 M MgSO
4
. Decolorante hace que sea
más fácil de detectar pequeñas cantidades (menos de
10 ng) de ADN. (Sambrook, sección 6.15).
Bibliografía
Ausubel, et al., (eds). Current Protocols in Molecular
Biology. Greene Publishing and Wiley-Interscience.
New York (1993).
Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T., Molecu-
lar Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Har-
bor Laboratory Press (1989).
¡Atención! El bromuro de etidio
es un mutágeno conocido.
Siempre use guantes al
manipular.
¡Atención! Use gafas de
seguridad UV y proteger la piel
cuando se utiliza cualquier
fuente de luz UV.
Nota: El bromuro de etidio
frena la migración del ADN en
un 15%.
Nota: Reducir al mínimo el
tiempo de tinción para evitar
pequeños fragmentos de ácido
nucleico de fuera de difusión
del gel.