Hoefer TE42 - Manual (Page 30)

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Transferencias de ácido nucleico
Los ácidos nucleicos normalmente deben ser
transferidos en forma desnaturalizada por la
unión más eficaz. El ARN es normalmente
desnaturalizado con glioxal antes de la separa-
ción o separados en geles de desnaturalización
que contengan formaldehído o mercurio de
metilo. Sin embargo, el ADN de doble cadena
es generalmente desnaturalizado en el gel con
NaOH. El álcali debe ser neutralizado y el gel
equilibró en tampón de transferencia antes de
electrotransferencia. Por tanto el ADN y ARN
geles, cualquier SDS también debe ser eliminado
para asegurar unión eficaz. Bittner y col. (1980)
geles de lavado tres veces, a 20 minutos cada
uno, para asegurar la eliminación completa de
desnaturalizantes y detergentes.
Véase Bittner et al. para un estudio de la eficacia
de transferencia de ADN de diferentes tamaños.
El tampón de transferencia Bittner contiene
25 mM de fosfato sódico, pH 6,5. También se
describe un método para la introducción de
muescas por limitada acción nucleasa con el fin
de facilitar la transferencia de fragmentos de
ADN más grandes.
Recomendados tampones de ADN incluyen el
sodio Bittner tampón fosfato (ver referencia) y de
TBE. Para el ARN, se recomienda TAE. TBE y
recetas TAE acciones se enumeran a continuación.
Estos tampones se diluyó con más frecuencia a
1X, pero la concentración puede oscilar hasta
0,1X. La refrigeración se recomienda para estos
buffers, especialmente a altas concentraciones.