Hoefer HE99X - Manual (Page 22)

ARN de movilidad
ARN también puede separarse sobre la base de su
tamaño. Para evitar anomalías debido a la estruc-
tura secundaria, el ARN se desnaturalizó, ya sea
antes o durante la electroforesis. Por ejemplo,
fragmentos de ARN desnaturalizado previamente
con glioxal y dimetilsulfóxido se pueden separar
en geles de agarosa neutros, o ARN puede ser
fraccionada en geles de agarosa que contienen
hidróxido de metilmercurio o formaldehído.
RNA de muestras por lo general requieren
carreras largas o tampones que se consumen
fácilmente, por lo que requieren la circulación.
El Hoefer SUB20C y SUB25C unidades hori-
zontales se recomiendan para esta aplicación en
lugar de la HE33.
ADN detección
ADN puede ser detectada por la fluorescencia de
bromuro de etidio consolidado o por autorradio-
grafía de ADN marcado radiactivamente.
El bromuro de etidio (0,5 µg/ml) se puede
añadir a la ejecución de tampón para controlar
el progreso de la muestra debido a la fluores-
cencia del colorante en virtud de una lámpara
UV revela ubicación banda. (Para comprobar
el progreso, apague la fuente de alimentación y
retire la tapa de la unidad de agarosa. Mantenga
un portátil lámpara UV cerca de la bandeja
en funcionamiento. Vuelva a colocar la tapa y
encienda la alimentación de nuevo para reanu-
dar la electroforesis.)
Alternativamente, después de la electroforesis,
el gel mancha en una solución de bromuro de
etidio (0,5 µg/ml H
2
O) durante 15 a 60 minutos
y luego ver o fotografiar la muestra sobre un
transiluminador UV.
Para fotografiar el gel, ya sea colocar la bandeja
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¡Atención! El bromuro de etidio
es un mutágeno conocido.
Siempre use guantes al
manipular.
¡Atención! Use gafas de
seguridad UV y proteger la piel
cuando se utiliza cualquier
fuente de luz UV.
Nota: El bromuro de etidio
frena la migración del ADN en
un 15%.
Nota: Reducir al mínimo el
tiempo de tinción para evitar
pequeños fragmentos de ácido
nucleico de fuera de difusión
del gel.
Nota: Para ver un ejemplo de
la electroforesis del ARN, se
refieren a Molecular Cloning:
A Laboratory Manual by J.
Sambrook and D.W. Russell.