Hoefer SE400 - Manual (Page 45)

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Recetas de gel
Las recetas de gel Laemmli son para 30 ml de una solución única concentración (suficiente
para un 1,5-mm 18 × 16 cm de gel). Tabulados son ingredientes y volúmenes de los geles de
poros relativamente grandes (de 7,5 a 10% gama T), así como pequeñas geles de poro (12,5
a 15% intervalo T). Un gel de 4% de apilamiento es común. La receta gradiente lineal es de
100 ml de solución. El volumen total necesaria depende del número de fundición geles y el
espesor de gel; ajuste si es necesario. Todos los geles se reticulado con 2,6% de C.
Tabla 5. Laemmli en gel recetas
(por cada 30 ml de solución de gel de resolución, 5 ml de solución de gel de apilamiento)
La resolución de gel de gel apilamiento
7,5% 10% 12,5% 15% 4%
La acrilamida stock (Solución #1) 7,5 ml 10 ml 12,5 ml 15 ml 0,67 ml
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Solución #2) 7,5 ml 7,5 ml 7,5 ml 7,5 ml
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Solución #3) 1,25 ml
10% SDS (Solución #4) 0,3 ml 0,3 ml 0,3 ml 0,3 ml 0,05 ml
H
2
O desionizada 14,6 ml 12,1 ml 9,6 ml 7,1 ml 3,00 ml
10% APS (Solución #5) 150 µl 150 µl 150 µl 150 µl 25 µl
TEMED 10 µl 10 µl 10 µl 10 µl 2,5 µl
Volumen final 30,0 30,0 ml 30,0 ml 30,0 ml 5,0 ml
Para geles de gradiente lineal, utilice volúmenes iguales de bajo y alto% de soluciones%
de acrilamida. Menos de APS se añade a extender el tiempo de polimerización, y menos
aún se añade a la solución T% superior para permitir que se produzca la polimerización de
arriba hacia abajo. En nuestra experiencia con las concentraciones en el ejemplo gradiente
10-20% por debajo, diez emparedados de gel se puede verter en una máquina de colada
de gel múltiple a un caudal de 5-10 ml / min.
Tabla 6. Lineales recetas en gel de gradiente (por 100 ml de solución)
10% T 20% T
La acrilamida stock (Solución #1) 33,30 ml 66,70 ml
Sacarosa — 15,00 g
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Solución #2) 25,00 ml 25,00 ml
10% SDS (Solución #4) 1,00 ml 1,00 ml
H
2
O desionizada a 100,00 ml a 100,00 ml
10% APS (Solución #5) 0,300 ml 0,060 ml
TEMED 0,036 ml 0,036 ml