Hoefer HB1000 - Manual (Page 23)

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2. Länge der Sonde
Ziel ist es, die Effizienz zu steigern Hybridisierung
unter Minimierung Hintergrund. Je größer die Sonde,
desto effizienter bindet Ziel. Je kleiner der Sonde,
jedoch eine immer größere Anzahl von Sonden-
molekülen vorliegenden pro Einheitsmenge (ng).
In den meisten Fällen Sonden reichen von 20 bis
1000 bps.
3. Salzkonzentration und Temperatur
Nukleinsäurehybridisierung erfordert sowohl Salz
(einwertigen Kationen, wie Na
+ ), um die Wirkungen
der Ladung Phosphatrückgrat entgegenzuwirken, und
Wärme, um nicht-denaturierenden kinetische Ener-
gie, die das langsame Keimbildungsstufe antreibt
bereitzustellen. Da die Wirkungen der einzelnen
Variablen beeinflussen die andere, zu wissen, die
Thermostabilität der Sonde-Ziel-Hybrid ist hilfreich.
Die Hybridisierungsrate ändert sich direkt mit der
Natrium-Ionen-Konzentration zwischen 0,03 und
1,2 M. Die meisten Protokolle erfordern eine Umge-
bung zwischen 0,5 und 1,1 M Na
+ .
Situation Antwort
G+C = 45 – 55% Folgen normalen Protokoll.
G+C < 45% Lower Salz und Temperatur.
G+C > 55% Heben Sie Salz-und Tempera-
turbedingungen.
Der Nachweis der Lower Salz und Temperatur.
Prüfziel Fehlanpassung.
Target und Sonde sind
Hybridisieren in einem
abgebaute in einer Formamid-basierten
wässrigen Umgebung. Pufferüberlauf Lösung.
Unzulässig hohe Verwenden Sie weniger Sonde.
Hintergrund. Hybridisieren bei niedrigeren
Salz/höherer Temperatur.
Waschen mit niedrigeren Salz/
höherer Temperatur.
Inkubieren mit sehr niedrigen
Salz; Änderung Nuklease
(Lösung).
Verwenden Sie einen kleineren
Sonde oder eine andere Sonde.
Reinigen Sonde von
Verunreinigungen vor der
Verwendung.