Hoefer HB1000 - Manual (Page 20)

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Las técnicas de hibridación
Hay dos pasos principales para una reacción de
hibridación: 1) que hibridan dos hebras de ADN
que lleva secuencias complementarias, y 2) la
detección del ADN hibridado. La proximidad de
las hebras de ADN determina la frecuencia del
suceso de unión y, por lo tanto, el éxito depende
de las concentraciones de ADN.
Dado que la concentración del ácido nucleico
diana es generalmente desconocida, es un exceso
de ADN sonda marcada que impulsa hacia
adelante la reacción de hibridación. Esto es
simplemente aumentando las posibilidades de
una sonda de encontrar un objetivo. Pero con
una enorme cantidad de sonda presente (en solu-
ción o en la superficie de una membrana) de la
señal de fondo también será enorme. El enfoque
típico para corregir el exceso de fondo sobre
una membrana de hibridación o diapositiva es
lavar en un tampón de baja salinidad como esto
favorece la disociación de la sonda no unida de
la membrana/diapositiva y no complementaria
de ADN. En las soluciones, una sonda puede ser
degradados enzimáticamente mediante el uso de
una sola hebra específica de nucleasa.