Hoefer HB1000 - Manual (Page 26)

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Protocolo
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La hibridación con nylon o nitrocelulosa
La hibridación de la sonda al ácido nucleico diana
que ha sido previamente transferidas a membranas de
nylon o nitrocelulosa se logra mediante la adición de
una sola hebra sonda a las membranas que han sido
incubadas primero con solución de prehibridación.
Tanto la prehibridación y soluciones de hibridación
contener amortiguadores diseñados para evitar la
unión accidental de la sonda a los filtros.
Reactivos y equipo
• Prehibridación/hibridación en solución [45% de
formamida, 5X SSPE (0,9 M NaCl, 50 mM de
sodio tampón fosfato, pH 7,4, 5 mM EDTA), SDS
al 0,1%, solución de Denhardt 5X (0,1% de cada
uno de Ficoll, polivinilpirrolidona, y bovino albúmina
de suero), y 100 mg/mL de ADN de esperma de
salmón desnaturalizado]. Mezclar bien y eliminar los
agregados antes de su uso.
• Hoefer hibridación botella (s) y las tapas
• 15 mL tubo de plástico
• Baño de agua hirviendo
• Cubo de hielo
• Guantes
• Beta bloqueo de escudo
• Hoefer HB1000 Horno de hibridación
Nota: En la preparación de
prehibridación/hibridación
soluciones, reactivos secos
añadir directamente a la
solución de formamida/SSC.
Incubar con agitación a 40-50ºC
durante 2 horas o hasta que
se disuelva. Conservar a
-20 °C. SDS se precipitará a
temperatura ambiente pero se
mantienen en solución a 37 °C.