Hoefer TE42 - Manual (Page 14)

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Montar la cinta de transferencia
1
Pre-húmedo nitrocelulosa o membranas de nylon con
agua destilada. Pre-húmedo PVDF o otras membranas
hidrófobas en metanol. A continuación, disfrutar de
todo tipo de membrana en tampón de transferencia
durante 2-5 minutos.
2
Abrir la cassette mediante la liberación de ambas
lengüetas de enganche a lo largo del borde opuesto de
las bisagras. Coloque el cassette abierto en una bandeja
llena con al menos 3 cm de tampón de transferencia.
3
Montar la pila de transferencia de manera que las
moléculas migrarán hacia la membrana. Para macro-
moléculas cargadas negativamente (tales como ácidos
nucleicos y la mayoría de las proteínas), construir la
pila en el medio gris de la casete (y luego colocar la
tapa de manera que el lado gris se enfrenta al plomo
rojo, o ánodo (+).
Coloque una de 3 mm de espesor de espuma de
la esponja en la cinta abrió sumergida y presione
suavemente hasta que todo el aire. Coloque una hoja
de papel secante en la esponja, y luego colocar la
lámina sobre el papel secante. Coloque el gel que
contiene una muestra que se ha separado electroforé-
ticamente y se equilibró (si es necesario) con tampón
de transferencia-en la membrana. Suavemente rodar
una pipeta de vidrio o tubo de ensayo sobre el gel
para eliminar el aire atrapado entre la membrana y
el gel. Cubrir el gel con una hoja de papel secante y
luego colocar una esponja del grosor adecuado (ver
el diagrama a continuación), de nuevo presionando
suavemente para eliminar el aire atrapado.
Nota: Siempre use guantes al
manipular las membranas para
evitar dejar huellas en ellos.
¡Importante! Tenga mucho cuidado
en eliminar todas las burbujas de
aire en cada paso, porque la pres-
encia de burbujas de aire, espe-
cialmente entre la membrana y el
gel, la transferencia de bloques.