Hoefer TE42 - Manual (Page 23)

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Solución de problemas
problema solución
Transferencia incompleta
Áreas en blanco en Quite todas las burbujas de aire atrapadas en el montaje de la pila
la membrana de transferencia: montar la pila mientras se sumerge en tampón de
transferencia, presione suavemente en cada una esponja, ya que se
agrega a la pila, y rodar una pipeta de vidrio o tubo de ensayo sobre
la membrana y el gel para eliminar todas las burbujas de aire.
Reducir la velocidad de agitación para evitar turbulencias.
Proceso de una sola tira o membrana en cada bandeja o cassette para
evitar la superposición.
Utilizar una solución tampón con una fuerza iónica más baja.
La continuidad de electrodos Comprobar. Durante la transferencia, un
flujo continuo de gas se libera a lo largo de toda la longitud de los
electrodos. Si las burbujas no se forman a lo largo de toda la longitud
del electrodo, reemplazar el electrodo.
Si casetes se arquean cuando está vacío, reemplace. El cassette de
embalaje excesivo hace que se inclinan, ver las instrucciones de
montaje recomendadas en la página 6.
Rejilla patrón en la membrana Añadir más hojas de papel secante para aumentar la holgura entre el
panel de casete y el gel. Tenga cuidado de no overstuff el cassette,
el gel se debe sostener firmemente y de manera uniforme entre las
esponjas, pero no con tanta fuerza que se exprime.
Las moléculas no migran Aumentar la intensidad de campo.
fuera del gel
Aumentar el período de transferencia. (Trate de duplicar la misma.)
No use la tinción o agentes de fijación en el gel antes de
la transferencia.
Utilizar un gel más delgada.
Reducir la concentración de gel de acrilamida.
Comprobar que el pH es cercano al pH deseado. La mayoría de los
tampones, no se debe ajustar, hacer tampón nuevo.
Utilizar 3,5 mM de SDS (0,1%) en el tampón de transferencia.
Evite incluir metanol en el tampón de transferencia o reducir la canti-
dad al mínimo absoluto.
Utilizar sustancias de grado reactivo.
Aumentar la cantidad de tiempo Southern blot se depurinado.
Aumentar la carga neta de la proteína mediante el cambio a un
tampón de transferencia con un pH diferente. Un pH más bajo (<6-7)
aumenta la carga positiva sobre las proteínas; un pH más alto (>6-7)
aumenta la carga negativa de las proteínas.