Hoefer TE42 - Manual (Page 28)

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Las transferencias de proteínas
Resúmenes de estudios
Gershoni y Palade (1982) investigaron los facto-
res que afectan la recuperación de proteínas a
partir de geles de SDS a nitrocelulosa o papel de
DBM. De acuerdo con sus conclusiones, metanol
en el sistema de tampón Towbin es necesario para
conseguir la unión eficientes a nitrocelulosa. El
metanol mejora de unión, en parte, mediante la
eliminación de la proteína unida a SDS. En ausen-
cia de metanol, etiquetados albúmina de suero
bovino (BSA) pasa a través de al menos cinco
capas de membranas. El metanol puede causar un
gel para reducir el tamaño, sin embargo, por lo
que la velocidad de elución disminuye. Mediante
el uso de una membrana catiónica (tal como
nylon), que se une a las proteínas más eficien-
temente, y omitiendo metanol desde el tampón
de transferencia, y Gershoni Palade obtiene
una transferencia mucho más cuantitativo. La
desventaja de la membrana catiónica es que las
manchas de proteínas también se unen así, de
manera que la tinción de fondo tiende a ser muy
alta. Adecuadamente inactivó, sin embargo, este
documento puede ser utilizado para la detección
de anticuerpos u otros métodos de superposición
de la identificación de proteínas. Un resumen de
tipo membrana y la concentración de metanol
recomendada sigue:
Membrana tipo Metanol %
Nylon cargado 0
Nitrocelulosa ≤ 20
PVDF ≤ 15
Algunos investigadores han informado que noso-
tros que una baja concentración de SDS (0,1%)
mejora la transferencia de la proteína a partir de
un gel de SDS. Burnette (1981) y Symington et
al. (1981) investigaron el efecto del peso mole-
cular de proteínas. Gibson (1981) describe un
método para aumentar el grado de transferencia
de grandes proteínas por escisión con limitado
pronasa durante la transferencia.