Hoefer HB1000 - Manual (Page 22)

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Versuchsprotokolle
Es gibt viele verschiedene Protokolle zur Verfü-
gung, die im Internet, in Zeitschriften und in den
Lehrbüchern. Wir verweisen mehrere am Ende
dieses Abschnitts.
1. Konzentration der Spezies
Ziel: Die optimale Menge von Zielmolekül abhängig
von der Komplexität der Zielnukleinsäure. Das amplifi-
zierte DNA beispielsweise kann in großen oder kleinen
Mengen ausgedrückt worden. Daher ist der Trick, um
mit ausreichender Ziel (~25 ug) beginnen und legt eine
ideale Menge experimentell.
Probe: Plan mehr Sonde als erwarteten Ziel haben.
Um dies zu ermitteln, führen Sie eine vom Aussterben
Experiment: seriell erhöhen die Menge des Ziels durch
2-fach gegen einen festen Betrag der Sonde. Hybridi-
sieren für eine kurze Zeitspanne und zu quantifizieren
die Menge der Sonde, hybridisiert hat. Solange die
Signal steigt und zeigt Linearität gibt es überschüssige
Sonde vorhanden ist (Abb. 6 links). Wenn die Signalpe-
gel ab, dann die Sonde nicht im Überschuss vorliegt
(Abb. 6 rechts).
Abb. 6. Analysis für
Sonde Überschuss in
Hybridisierungsreaktionen.
Menge an Zielnuk-
leinsäure (willkürliche
Einheiten) Menge an Zielnuk-
leinsäure (willkürliche
Einheiten)
Sonde
hybridisierte
(%)
Sonde
hybridisierte
(%)