Hoefer HB1000 - Manual (Page 27)

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Verfahren
1. 15 mL Prähybridisierungslösung jeder Hybridisier-
ung Flasche mit dem Blot. Entfernen Sie Luftbla-
sen zwischen dem Glas und Blot. Verschließen Sie
die Flaschen, legen die Flaschen an den Rädern
der Flaschenhalter Karussell, und schließen Sie die
Hybridisierung Backofentür.
2. Inkubieren des Blots bei 42 °C für 1 Stunde.
3. Entfernen Sie die Prähybridisierungslösung und
ersetzen mit 10 ml Hybridisierungslösung.
4. Bei Verwendung radioaktiv markierten Sonden arbe-
iten sicher von der anderen Seite eines Beta-block-
ierende Abschirmung. Pipette 1 × 10
6 Zählungen
pro Minute der radioaktiv markierten Sonde, oder
200 ng biotinylierter Sonde, in einem 15 ml
Plastikröhrchen. Verschließen Sie den Schlauch
mit einer Kunststoff-Kappe und stecken ein Loch
in der Spitze mit einer Spritze Nadel Druck zu
verhindern Aufbau während des Kochens.
5. Denaturieren die Sonde, indem die Proben im
kochenden Wasserbad und Heizung für 10 Minuten.
Sofortüberweisung das Rohr auf Eis für 5 Minuten
(Renaturierung zu verhindern). 5 mL Hybridisier-
ungspuffer auf die Sonde und Transfer zum Hybrid-
isierung Flasche mit dem Blot. VERMEIDEN Gießen
die Sonde direkt auf dem Blot.
6. Inkubieren im Hoefer HB1000 Hybridisierungsofen
für 6 bis 8 Stunden bei 42 bis 56 °C.
Waschen des Blots
• Tupperware Behälter (bemessen, um den Fleck nicht
enthalten)
• 0,1X SSC, 0,1% SDS (bis 50 °C vorgewärmt)
• 2X SSC, 0,1% SDS (bei Raumtemperatur)
• 2X SSC (Raumtemperatur)
• 0,15X SSC, 0,1% SDS (bis 50 °C vorgewärmt)
• Handschuhe
• Filterpapier
• Karton
• Plastikfolie
• Tape
Für radioaktive Sonden, müssen Sie auch:
• X-ray Filmhalter
• X-ray-Film
• Intensivierung Bildschirm