Hoefer HB1000 - Manual (Page 20)

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Tecniche di ibridazione
Ci sono due fasi principali di una reazione di
ibridazione: 1) ibridanti due filamenti di DNA
portando sequenze complementari, e 2) il rile-
vamento del DNA ibridato. Prossimità dei fila-
menti di DNA determina la frequenza dell’evento
vincolante e, quindi, il successo dipende dalle
concentrazioni di DNA.
Poiché la concentrazione di acido nucleico bersa-
glio è solitamente sconosciuto, è un eccesso di
DNA sonda marcata che spinge in avanti la
reazione di ibridazione. Questo è semplicemente
aumentando le probabilità di una sonda incon-
trare un bersaglio. Ma con una quantità enorme
di presenza sonda (in soluzione o sulla superfi-
cie di una membrana), il segnale di fondo sarà
enorme. L’approccio tipico per correggere sfondo
eccesso su una membrana o ibridazione diaposi-
tiva è lavare in un buffer sale partire da questo
favorisce la dissociazione di sonda non legata
dalla membrana/slitta e dal non-DNA comple-
mentare. In soluzioni, una sonda può essere
enzimaticamente degradata utilizzando un singolo
filamento specifiche nucleasi.