Hoefer HB1000 - Manual (Page 26)

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Protocollo
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Ibridazione di nylon o nitrocellulosa
Ibridazione della sonda di acido nucleico bersaglio
che è stato precedentemente trasferito su membrane
di nylon o nitrocellulosa viene realizzato aggiungendo
catena singola sonda che le membrane sono state
incubate prima con soluzione preibridazione. Sia la
preibridazione e soluzioni di ibridazione contengono
buffer progettate per impedire vincolante accidentale
della sonda ai filtri.
Reagenti e apparecchiature
• Preibridazione/ibridazione soluzione [45%
formammide, 5X SSPE (0,9 M NaCl, 50 sodio
mM tampone fosfato, pH 7,4, 5 mM EDTA), 0,1%
SDS, soluzione 5X Denhardt (0,1% ciascuno di
Ficoll, polivinilpirrolidone, e bovino albumina
sierica), e 100 mg/mL di DNA di sperma di salmone
denaturato]. Mescolare bene e togliere aggregati
prima dell’uso.
• Hoefer bottiglia ibridazione (s) e tappi
• 15 mL di tubo di plastica
• Bagno di acqua bollente
• Benna di ghiaccio
• Guanti
• Beta blocco schermo
• Hoefer HB1000 fornetto
Nota: Quando si prepara
preibridazione/ibridazione
soluzioni, aggiungere i reagenti
a secco direttamente alla
formammide/SSC soluzione.
Incubare con miscelazione
a 40-50 °C per 2 ore o fino
a dissoluzione. Conservare a
-20 °C. SDS sarà precipitato
a temperatura ambiente ma
rimangono in soluzione a 37 °C.