Hoefer HB1000 - Manual (Page 22)

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Protocolli sperimentali
Ci sono molti diversi protocolli disponibili sul
web, in riviste e nei libri di testo. Referenziamo
diversi alla fine di questa sezione.
1. Concentrazione di specie
Target: La quantità ideale di molecola bersaglio
dipende dalla complessità dell’acido nucleico bersaglio.
Il DNA amplificato, per esempio, può essere espressa
in grandi o piccole quantità. Pertanto, il trucco è quello
di iniziare con destinazione sufficiente (~25 mg) e di
determinare un importo ideale sperimentalmente.
Sonda: piano per avere più sonda di destinazione
previsto. Per determinare questo, eseguire un espe-
rimento di estinzione: in serie aumentare la quantità
di target per 2 volte contro un importo fisso di sonda.
Ibridizzano per un breve periodo di tempo e quan-
tificare la quantità di sonda che ha ibridato. Finché
il segnale aumenta e spettacoli linearità è presente
la sonda in eccesso (Fig. 6 a sinistra). Se i livelli
di segnale fuori, quindi la sonda non è presente in
eccesso (Fig. 6 a destra).
Fig 6. Analisi per eccesso di sonda
in reazioni di ibridazione.
Quantità di acido
nucleico bersaglio (unità
arbitrarie) Quantità di acido
nucleico bersaglio (unità
arbitrarie)
Sonda
ibridato
(%)
Sonda
ibridato
(%)