Hoefer HB1000 - Manual (Page 20)

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Les techniques d’hybridation
Il ya deux étapes principales pour une réaction
d’hybridation: 1) d’hybridation de deux brins
d’ADN portant des séquences complémentaires,
et 2) la détection de l’ADN hybridé. Proximité
des brins d’ADN détermine la fréquence de l’évé-
nement de liaison et, par conséquent, le succès
dépend des concentrations d’ADN.
Puisque la concentration de l’acide nucléique cible
est généralement connu, il ya un excès d’ADN
sonde marquée qui fait avancer la réaction d’hy-
bridation. Ceci est tout simplement augmenter les
chances d’une sonde rencontre une cible. Mais
avec une énorme quantité de sonde présente (en
solution ou sur la surface d’une membrane),
le signal de fond sera également énorme. L’ap-
proche classique de corriger fond excès sur une
membrane d’hybridation ou coulisseau est à laver
dans un tampon de sel bas que cela favorise la
dissociation de la sonde non liée de la membrane/
coulisseau et de l’ADN non complémentaire.
Dans des solutions, une sonde peut être dégradée
par voie enzymatique à l’aide d’un simple brin
spécifique à la nucléase.