Hoefer HB1000 - Manual (Page 22)

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Les protocoles expérimentaux
Il ya beaucoup de différents protocoles dispo-
nibles sur le Web, dans les journaux et dans
les livres. Nous référencer plusieurs à la fin de
cette section.
1. Concentration des espèces
Cible: La quantité de molécule cible idéale dépend
de la complexité de l’acide nucléique cible. L’ADN
amplifié, par exemple, peuvent avoir été exprimées en
quantités petites ou grandes. Par conséquent, l’astuce
est de commencer avec l’objectif suffisant (~25 mg) et
de déterminer la quantité idéale expérimentalement.
Sonde: Plan d’avoir plus que la sonde cible attendue.
Pour le déterminer, d’effectuer une expérience d’ex-
tinction: série d’augmenter la quantité de cible de 2
fois contre un montant fixe de la sonde. S’hybrider
à une courte longueur de temps et de quantifier la
quantité de sonde qui s’est hybridée. Tant que le signal
augmente et spectacles linéarité est présent excès de
sonde (figure 6 gauche). Si les niveaux de signal de
repos, puis la sonde n’est pas présente en excès (figure
6 droite).
Fig 6. Analyse de l’excès de sonde
dans des réactions d’hybridation.
Quantité d’acide
nucléique cible (unités
arbitraires) Quantité d’acide
nucléique cible (unités
arbitraires)
Sonde
hybridée
(%)
Sonde
hybridée
(%)