Leica Biosystems ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND - Manual (Page 5)

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Utilisation prévue
Le présent système de détection est destiné à une utilisation diagnostique in vitro.
ChromoPlex
™ 1 Dual Detection est un système sans biotine de conjugués d’anticorps et de polymères marqués à la peroxydase du
raifort (HRP) et à la phosphatase alcaline (AP) pour la détection d’anticorps IgG primaires de souris et de lapin liés à des tissus. Il est
prévu pour la coloration sur le système automatisé BOND de coupes de tissus fixés au formol et inclus dans de la paraffine.
L’interprétation clinique de toute coloration, ou de son absence, doit être complétée par des études morphologiques. Des contrôles
adéquats doivent être évalués par un pathologiste qualifié dans le contexte de l’anamnèse clinique du patient et d’autres tests
diagnostiques.
Le ChromoPlex 1 Dual Detection doit être utilisé selon les meilleures pratiques de laboratoire dans les contrôles de tissus. À des fins
d’assurance, les laboratoires doivent colorer chaque échantillon de patient conjointement à des contrôles positifs, négatifs et à d’autres
contrôles spécifiques de tissus le cas échéant.
Résumé et explication
Les techniques immunohistochimiques peuvent être utilisées pour démontrer la présence d’antigènes dans des tissus et des cellules (cf.
« Utilisation des réactifs du BOND » dans la documentation de l’utilisateur du BOND).
Le ChromoPlex 1 Dual Detection utilise une nouvelle technologie de polymérisation contrôlée pour préparer des conjugués d’anticorps
et de polymères marqués à la HRP et à la AP. Le système de détection évite l’utilisation de streptavidine et de biotine, et par conséquent
élimine une coloration non spécifique provenant de biotine endogène.
Le ChromoPlex 1 Dual Detection fonctionne comme suit :
L’échantillon est incubé avec du peroxyde d’hydrogène pour bloquer l’activité de la peroxydase endogène. •
Un cocktail d’anticorps primaires spécifiques de souris et de lapin fournis par l’utilisateur est appliqué. •
Le réactif IgG poly-HRP localise les anticorps de souris. •
Le réactif IgG poly-AP localise des anticorps de lapin. •
Le premier substrat chromogène, tétrahydrochlorure de 3,3’-diaminobenzidine (DAB), permet de visualiser les anticorps de souris •
sous forme d’un précipité marron.
Le deuxième substrat chromogène, le rouge nucléaire rapide (Fast Red), permet de visualiser les anticorps de lapin sous forme d’un
•
précipité rouge.
Une contre-coloration à l’hématoxyline (bleu) permet la visualisation des noyaux cellulaires.
•
L’utilisation du ChromoPlex 1 Dual Detection combiné au système automatisé BOND réduit la possibilité d’erreur humaine et de
variabilité inhérente à la dilution des réactifs individuels, au pipetage manuel et à l’application du réactif.
Réactifs fournis
Les réactifs fournis sont suffisants pour 25 colorations individuelles BOND, soit un maximum de 100 lames.
Pour réaliser un maximum de 100 lames avec ce système de détection, celles-ci doivent être groupées par 4 ou plus, par ensemble de
coloration de lames. Si la mise en lot se fait avec des quantités inférieures à 4, moins de lames seront colorées.
Peroxide Block (15 mL) 3 à 4 % de peroxyde d’hydrogène. 1.
Polymer mHRP (15 mL) Poly-HRP anti-souris contenant (v/v) 10 % de sérum animal dans du sérum physiologique TBS et 0,09 % 2.
ProClin ™ 950.
Polymer rAP (15 mL) Poly-AP anti-lapin contenant (v/v) 10 % de sérum animal dans du sérum physiologique TBS et 0,09 % ProClin 3.
950.
DAB Part 1 (2 mL) 66 mM tétrahydrochlorure de 3,3’-diaminobenzidine dans une solution de stabilisateur.
4.
DAB Part B (35 mL) ≤ 0,1 % (v/v) peroxyde d’hydrogène dans une solution de stabilisateur. 5.
Red Part A (5.5 mL) Activateur contenant 0,5 % ProClin 950. 6.
Red Part B (1.0 mL) Substrat. 7.
Red Part C (1.0 mL) Substrat. 8.
Red Part D (35 mL) Solution tampon contenant 0,5 % ProClin 950. 9.
Hematoxylin DS9477 (15 mL) < 0,1 % Hématoxyline. 10.
Dilution et mélange
Le ChromoPlex 1 Dual Detection est optimisé pour l’utilisation avec le système BOND.
La reconstitution, le mélange, la dilution ou le titrage de ces réactifs n’est pas nécessaire.
Matériel nécessaire non fourni
Support de montage compatible avec le ChromoPlex 1 Dual Detection (cf. Précautions).
Se référer à « Utilisation des réactifs du BOND » dans la documentation de l’utilisateur du BOND pour une liste complète des matériels
exigés pour le traitement et la coloration immunohistochimique d’échantillons utilisant le système BOND.
ChromoPlex ™ 1 Dual Detection for BOND
Référence: DS9477