Bio-Rad VINEO™ Brettanomytest PCR Kit - Manual (Page 21)

doigts sur le film optique utilisé pour sceller les microplaques. Ne pas
écrire sur les bouchons des tubes PCR. Dans les deux cas,
l’enregistrement des données par l’appareil peut être perturbé.
Nous vous recommandons vivement de lire l'ensemble du protocole
avant de commencer l'essai.
Respecter scrupuleusement le protocole proposé.
7 - PRELEVEMENT ET TRANSPORT DES ECHANTILLONS
Les échantillons de vins sont collectés, en conditions aseptiques, dans des
récipients stériles en verre, en polyéthylène ou en matériel similaire.
Les échantillons doivent être remis au laboratoire le plus rapidement possible,
de préférence dans les 24 heures et pas plus de 48 heures après le
prélèvement. Si les échantillons sont transportés et analysés dans les 24
heures, le transport et le stockage ont lieu à température ambiante (+18°C à
+30°C). Si les échantillons sont transportés et analysés dans les 48 heures, le
transport et le stockage ont lieu entre +2°C et +8°C.
8 - EXTRACTION DE L’ADN
L’extraction de l’ADN doit être réalisée en utilisant le kit développé par
Bio-Rad pour l’extraction d’ADN à partir d’échantillons de vin VINEO™
Extract DNA Kit (réf. Bio-Rad 354-8100).
9 - PCR EN TEMPS REEL
1. Mise en marche appareil PCR
Allumer dans l’ordre le thermocycleur, l’ordinateur puis ouvrir le logiciel
Opticon Monitor. Pour plus d’informations et pour la définition des
paramètres du logiciel consulter le manuel utilisateur du thermocycleur
Bio-Rad pour le kit VINEO™ Brettanomytest PCR Kit.
2. Préparation des réactions PCR
2.1 Préparer le mélange réactionnel VINEO™ Brettanomytest PCR Kit en
mélangeant (40 μL/échantillon) de la solution d’amplification (tube à
bouchon blanc) et (5 μL/échantillon) des sondes fluorescentes (tube à
bouchon rose). Réaliser le mélange réactionnel en fonction du nombre
d’échantillons et des contrôles à analyser (au minimum 1 duplicat (2) du
contrôle positif Qs PCR et un contrôle négatif doivent être utilisés par
plaque). Le tableau de préparation du mélange réactionnel d’amplification
PCR présent en Annexe A indique les quantités nécessaires de chaque
réactif à mélanger en fonction du nombre d’échantillons à analyser. Ne
pas oublier de comptabiliser les 3 points de contrôles.
Note : ne pas mélanger les lots de réactifs.
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