Bio-Rad VINEO™ Brettanomytest PCR Kit - Manual (Page 36)

2.2 Una vez preparada, la mezcla reactiva (soluciones de amplificación y
sondas) debe utilizarse inmediatamente, o bien puede conservarse
durante 2 horas entre +2 °C y +8 °C.
2.3 Repartir 45 μL de esta mezcla reactiva por pocillos, según el plan de
placa definido. En los Anexos B y C se proponen planes de placa para
los termocicladores Chromo4™/CFX96™ y MiniOpticon™,
respectivamente.
Añadir 5 μL de muestra, de control negativo o de control positivo Qs
PCR y sellar herméticamente los pocillos de la placa o de las tiras. Es
importante insistir en el cierre de los pocillos y de las tiras de pocillos para
evitar toda posible evaporación durante la PCR.
Es importante asimismo evitar la presencia de burbujas en el fondo de
los pocillos; para ello deberá pipetearse con cuidado. Para eliminar las
burbujas una vez sellada la placa o cerradas las tiras de pocillos para
PCR, éstas pueden centrifugarse brevemente. La placa puede
conservarse durante 2 horas entre +2 °C y +8 °C.
2.4 Colocar la placa o las tiras para PCR en el termociclador. Asegurarse de
que estén orientadas correctamente (pocillos A1 en la parte superior
izquierda).
Cerrar el módulo reactivo.
3. Inicio de la reacción de amplificación
Para iniciar la PCR, consulte el manual del usuario del termociclador Bio-Rad
para el kit VINEO™ Brettanomytest PCR Kit.
10 - ANÁLISIS DE DATOS
El análisis de los datos puede realizarse directamente al final de la reacción
de amplificación o posteriormente, reabriendo el fichero de datos. Para abrir
los ficheros de datos y analizar los resultados de la PCR, consulte el manual
del usuario del termociclador Bio-Rad para el kit VINEO™ Brettanomytest
PCR Kit.
11 - INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Para obtener los resultados del análisis, basta con leer los valores Ct (del
inglés «cycle threshold», ‘ciclo umbral’): valor del ciclo de amplificación a
partir del cual la fluorescencia se eleva significativamente por encima del
ruido de fondo.
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