Bio-Rad VINEO™ Brettanomytest PCR Kit - Manual (Page 22)

2.2 Après préparation, le mélange réactionnel (Solutions d’amplification et de
sondes) doit être utilisé immédiatement, ou il peut être conservé pendant
2 heures de +2°C à +8 °C.
2.3 Répartir 45 μl de ce mélange réactionnel par puits, selon le plan de plaque
défini. Les Annexes B et C proposent des plans de plaque à utiliser
respectivement sur les thermocycleurs Chromo4™/CFX96™ et
MiniOpticon™.
Ajouter 5 μl d’échantillon ou de contrôle négatif ou de contrôle positif Qs
PCR et sceller de façon hermétique les puits de la plaque ou des
barrettes. Il est important d’insister sur la fermeture des puits et des
barrettes pour éviter tout phénomène d’évaporation au cours de la
réaction de PCR.
Il est important d’éviter la présence de bulles au fond des puits en
pipetant précautionneusement. Pour éliminer des bulles, après avoir
scellé la plaque ou avoir fermé les barrettes PCR, il est possible de
centrifuger brièvement la plaque ou les barrettes PCR. La plaque peut
être conservée pendant 2 heures de +2°C à +8 °C.
2.4 Placer la plaque ou les barrettes PCR dans le thermocycleur. S’assurer
de leur bonne orientation (puits A1 en haut à gauche).
Fermer le module réactionnel.
3. Lancement de la réaction d’amplification
Pour le lancement de la PCR, consulter le manuel utilisateur du
thermocycleur Bio-Rad pour le kit VINEO™ Brettanomytest PCR Kit.
10 - ANALYSE DES DONNEES
L’analyse des données peut être réalisée directement à la fin de la réaction
d’amplification ou ultérieurement en ré-ouvrant le fichier de données. Pour
ouvrir des fichiers de données et analyser les résultats de la PCR, consulter le
manuel utilisateur du thermocycleur Bio-Rad pour le kit VINEO™
Brettanomytest PCR Kit.
11 - INTERPRETATION DES RESULTATS
Pour obtenir les résultats de l’analyse, il suffit de lire les valeurs de Ct (Cycle
treshold) : valeur du cycle d’amplification à partir duquel la fluorescence
s’élève significativement au-dessus du bruit de fond.
L’analyse manuelle permettra uniquement une analyse qualitative (présence
ou absence).
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