Bio-Rad VINEO™ Brettanomytest PCR Kit - Manual (Page 35)

Recomendamos encarecidamente leer el protocolo completo antes
de comenzar el ensayo.
Cumpla escrupulosamente el protocolo propuesto.
7 - EXTRACCIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS
Las muestras de vino se recogen, en condiciones asépticas, en recipientes
estériles de vidrio, polietileno o de otro material parecido.
Las muestras deben enviarse al laboratorio lo más rápidamente posible,
preferentemente antes de 24 horas y no más de 48 horas tras su extracción.
Si las muestras se transportan y analizan en un plazo de 24 horas, el transporte
y almacenamiento se realizan a temperatura ambiente (entre +18 C y +30 C).
Si las muestras se transportan y analizan en un plazo de 48 horas, el transporte
y almacenamiento se realizan a una temperatura de entre +2 C y +8 C.
8 - EXTRACCIÓN DEL ADN
La extracción del ADN debe realizarse con el kit VINEO™ Extract DNA Kit
(ref. Bio-Rad 354-8100), desarrollado por Bio-Rad para la extracción de ADN
a partir de muestras de vino.
9 - PCR EN TIEMPO REAL
1. Puesta en marcha de la máquina de PCR
Encender, por este orden, el termociclador y el ordenador y, a continuación,
abrir el software Opticon Monitor. Encontrará más información y la definición
de los parámetros del software en el manual del usuario del termociclador
Bio-Rad para el kit VINEO™ Brettanomytest PCR Kit.
2. Preparación de las reacciones de PCR
2.1 Preparar la mezcla reactiva del kit VINEO™ Brettanomytest PCR Kit con
40 μL/muestra de la solución de amplificación (tubo con tapón blanco)
y 5 μL/muestra de sondas fluorescentes (tubo con tapón rosa). Hacer
mezcla reactiva en función del número de muestras y de controles que
se desee analizar, teniendo en cuenta que por cada placa deben usarse
como mínimo 1 duplicado (2) del control positivo Qs PCR y un control
negativo. La tabla de preparación de la mezcla reactiva de amplificación
por PCR, incluida en el Anexo A, indica las cantidades de cada reactivo
que deben mezclarse en función del número de muestras que se desee
analizar. No olvide contar los 3 puntos de control.
Nota: No mezclar lotes de reactivos.
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