Bio-Rad VINEO™ Brettanomytest PCR Kit - Manual (Page 23)

Il est nécessaire d’utiliser les logiciels Opticon Monitor™ (version 3.3 et plus)
ou CFX Manager™ Industrial Diagnostic Edition pour une interprétation
automatisée et quantitative. Un rapport complet pourra être imprimé (Cf.
notice d’utilisation des logiciels).
1. Contrôles
Avant l’interprétation finale des résultats il est nécessaire de vérifier les
résultats des contrôles négatif et positif.
Pour que le test soit valide, les résultats des contrôles négatif et positif
doivent être les suivants :
* N/A signifie « Non Applicable ». Le logiciel indique N/A pour le Ct d’un échantillon quand la courbe de
fluorescence ne croise pas le seuil.
Si les résultats des contrôles positif Qs PCR et négatif sont différents de ceux
décrits dans le tableau ci-dessus, il est nécessaire de recommencer la PCR.
2. Echantillons
Un échantillon est considéré positif pour Brettanomyces bruxellensis si une
valeur de Ct ≥ 10 est obtenue pour le fluorophore FAM.
Si aucune valeur n’est obtenue pour le Ct
FAM
(Ct
FAM
= N/A), l’interprétation
du résultat dépend de la valeur du contrôle interne :
- Un échantillon est considéré négatif pour Brettanomyces bruxellensis si
aucune valeur de Ct n’est obtenue pour le fluorophore FAM (Ct
FAM
=N/A)
et si le Ct du contrôle interne est supérieur ou égal à 28. (Ct
HEX
≥ 28).
- Une valeur N/A pour le Ct
HEX
du contrôle interne indique, lorsque le
Ct
FAM
de la cible est également N/A, qu’un phénomène d’inhibition de
la réaction de PCR a probablement eu lieu. Dans ce cas, l’échantillon
d’ADN doit être dilué (au 1/10
e par exemple) en eau distillée stérile, puis
soumis à une nouvelle PCR.
- Si le Ct
HEX
du contrôle interne est inférieur à 28 il n’est pas possible
d’interpréter le résultat. Vérifier que le seuil a été correctement placé ou
que la courbe brute montre un aspect caractéristique d’amplification
exponentielle. Si la courbe observée n’est pas correcte il sera
nécessaire de répéter le test PCR pour cet échantillon.
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© 2010 Bio-Rad
Détection de Brettanomyces
bruxellensis (FAM)
Détection du contrôle interne
(Canal HEX)
Contrôle négatif Ct = N/A* 25 ≤ Ct ≤ 40
Contrôle positif Qs PCR 27 ≤ Ct ≤ 37 Non significatif